2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結構重疊,電子束不能穿透;,3切片應耐電子束的強烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動識別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標尺、放大倍數、儀器型號等信息,還能夠對圖片中進行上偽色突出對比度、選區傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
鋨酸是強氧化劑,固定脂類、膜結構,有電子染色作用,3脫水,用適當的有機溶劑取代組織和細胞中的游離態水分,使之能與包埋劑混合,脫水要徹底,更換液體動作要迅速,脫水時間不宜過長,且固定后的樣品要充分漂洗,4滲透、包埋與聚合,4,1滲透,2包埋與聚合,加溫在60℃聚合形成固體基質,牢固地支撐整個細胞結構或組織,制成適于機械切割的固體樹脂包埋塊,利于切片,常用玻璃刀、鉆石刀進行超薄切片,刀上要裝水槽,并注入槽液。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現結果更全面,我們一般采用的雙染法進行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細胞核、結締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結構、脂類、糖原等,易與CO2反應成沉淀,染色中應采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結構、元素和原子分散,其本質是信號的空間分布,基本機理與比例尺地圖是一致的。