在透射電鏡中,用電子束代替平行入射光束,用薄膜狀的樣品代替周期性結(jié)構(gòu)物體,就可重復(fù)以上衍射成像過(guò)程,(2)對(duì)于透射電鏡,改變中間鏡的電流,使中間鏡的物平面從一次像平面移向物鏡的后焦面,可得到衍射譜,固定的目的主要是終止組織細(xì)胞的生化過(guò)程,同時(shí)把它們的超微結(jié)構(gòu)改變控制在zui小范圍內(nèi),并保護(hù)這些結(jié)構(gòu)在后續(xù)的脫水、包埋等過(guò)程中不被破壞;常用雙固定法,用一定濃度的戊二醛對(duì)樣品預(yù)固定,漂洗后使用鋨酸對(duì)樣品進(jìn)行后固定。
鋨酸是強(qiáng)氧化劑,固定脂類、膜結(jié)構(gòu),有電子染色作用,3脫水,用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑取代組織和細(xì)胞中的游離態(tài)水分,使之能與包埋劑混合,脫水要徹底,更換液體動(dòng)作要迅速,脫水時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),且固定后的樣品要充分漂洗,4滲透、包埋與聚合,4,1滲透,2包埋與聚合,加溫在60℃聚合形成固體基質(zhì),牢固地支撐整個(gè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)或組織,制成適于機(jī)械切割的固體樹脂包埋塊,利于切片,常用玻璃刀、鉆石刀進(jìn)行超薄切片,刀上要裝水槽,并注入槽液。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現(xiàn)結(jié)果更全面,我們一般采用的雙染法進(jìn)行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細(xì)胞核、結(jié)締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結(jié)構(gòu)、脂類、糖原等,易與CO2反應(yīng)成沉淀,染色中應(yīng)采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結(jié)構(gòu)、元素和原子分散,其本質(zhì)是信號(hào)的空間分布,基本機(jī)理與比例尺地圖是一致的。